Ultrastrukturalna lokalizacja cytochromu b w błonach spoczynkowych i fagocytujących ludzkie granulocyty.

Oczyszczone za pomocą powinowactwa królicze przeciwciała przeciwko lekowi lub łańcuchowi ciężkiego łańcucha ciężkiego przeciw neutrofilowi cytochromu b zostały użyte do immunocytochemicznego i biochemicznego zlokalizowania cytochromu b w neutrofilach i eozynofilach. Przeciwciała były monospecyficzne, rozpoznając odpowiednio polipeptydy o wielkości 91 i 22 kDa w Western błotach z całych ekstraktów neutrofili. Przeciwciała zastosowano w analizie Western blot subkomórkowych frakcji oczyszczonych neutrofili, aby potwierdzić, że rozkład absorpcji widmowej cytochromu b jest porównywalny z rozkładem dwóch podjednostek. Cienkie skrawki granulowanych cryofixed granulocytów z destylacją molekularną znakowano przeciwciałami anty-cytochromowymi b, a następnie inkubowano z drugim przeciwciałem skoniugowanym z biotyną i znakowano końcowo koloidalnym złotem sprzężonym ze streptawidyną. Mikroskopia elektronowa wykazała, że lekkie i ciężkie łańcuchy cytochromu b były zlokalizowane głównie (80%) do 0,1-0,2-mikronowych okrągłych lub eliptycznych struktur podobnych do granulek w neutrofilach i 0,4-0,5-mikronowych granulek w eozynofilach. Około 20% cytochromu b było zlokalizowane na powierzchni, co potwierdza badania frakcjonowania podkomórkowego. Eksperymenty podwójnego barwienia na granulocytach obojętnochłonnych przy użyciu poliklonalnego króliczego przeciwciała przeciwko laktoferynie wskazywały, że struktury niosące cytochrom zawierają również laktoferynę, a zatem są specyficznymi granulkami. Gdy przeprowadzono analizę na neutrofilach, które fagocytowały Staphylococcus aureus, znaleziono cytochrom b w błonie fagosomalnej przylegającej do ściany komórkowej bakterii.
[patrz też: goldenmed serock, schizofrenia paranoidalna opis przypadku, szpital radom tochtermana ]